Разделение и культивирование микроорганизмов

一 、 Разделение и выращивание

Микроорганизмы существуют в природе в смешанном состоянии. Чтобы получить желаемые штаммы, они должны быть отделены от них. Если он случайно загрязнен, когда он сохраняется, он должен быть очищен. Существует множество методов для разделения и очистки микроорганизмов, но основной принцип сходен. То есть выделяемый образец в определенной степени разбавляется, а клетки (или споры) микроорганизма максимально удерживаются в дисперсном состоянии, а затем выращиваются в чистую одиночную колонию. Однако вышеуказанная работа неотделима от процесса инокуляции, который заключается в переносе микроорганизма в другую стерилизованную среду.

Материал и инструмент классификации микробиологической инокуляции:

Инкубатор температуры постоянного, кольцо прививки, стеклянная штанга, пипетка, лампа алкоголя, питательная среда, Э. коли, субтилис бациллы, золотистый стафилококк, дрожжи, етк.

Метод работы прививки:

1. наклонная инокуляция (подключение золотистым стафилококком)

Перед работой протрите руки 75% спиртом и зажгите спиртовую лампу после того, как спирт улетучится. Удерживайте деформационную трубку и наклонную поверхность между большим пальцем левой руки и четырьмя другими пальцами так, чтобы наклонная поверхность и сторона с деформацией были обращены вверх и в горизонтальном положении. Во-первых, поверните деформацию и тампон склона, чтобы его было легко вытащить при инокуляции. Держите прививочное кольцо в левой руке (как ручку), сначала простерилизуйте конец кольца на пламени, а затем простерилизуйте его, проникнув в остальную часть пробирки. Используйте безымянный палец, мизинец и ладонь правой руки, чтобы одновременно вытащить пробирку для микробов и ватную пробку или колпачок пробирки наклонной пробирки, а затем медленно стерилизовать рот пробирки (не горите слишком горячо). Вытяните сожженное прививочное кольцо в пробирку с семенами, прикоснитесь к прививочному кольцу на внутренней стенке пробирки или к среде без мха, дайте ему достаточно остыть, затем осторожно соскоблите немного мха и затем вытащите его из пробирки Вакцинационное кольцо. Быстро вставьте привитое кольцо с бактериями в другую пробирку, которую нужно подключить. Сделайте форму «Z» от нижней части склона вверх и вниз плотно. Иногда также можно использовать инокуляционную иглу, чтобы вытянуть линию в центре среды для косой инокуляции, чтобы наблюдать за характеристиками роста бактерий. После завершения прививки петля прививки извлекается и вставляется ватная пробка. Стерилизовать прививочное кольцо. Опустите петлю для прививки и затяните ватную пробку.

2. Жидкая инокуляция

Подключите наклонную среду к жидкой среде. Этот метод используется для наблюдения за характеристиками роста бактерий и измерения биохимической реакции. Метод работы такой же, как и раньше, но рот пробирки наклонен вверх, чтобы предотвратить вытекание культуральной жидкости и соединение бактерий, привейте несколько раз протрите кольцо и внутреннюю стенку пробирки, чтобы промыть бактерии на кольце. После прививки вставляется ватная пробка, и пробирка осторожно постучивается по ладони руки, чтобы полностью рассеять бактерии. Винокулируют жидкую среду из жидкой среды. Когда штамм жидкий, используйте стерильную пипетку или капельницу в дополнение к прививочному кольцу. При инокуляции просто вытащите ватную пробку рядом с пламенем, пропустите горловину трубки через пламя, используйте стерильную пипетку, чтобы всасать бактериальный раствор в культуральном растворе, и равномерно встряхните его.

3. Пластинчатая инокуляция

Забейте и распространите бактерии по тарелке. Поперечно-линейная инокуляция См. Отдельный метод поперечных линий. Распространение и инокуляция Вводите бактериальный раствор в пластину стерильной пипеткой и равномерно покройте поверхность пластины стерилизованным стеклянным стержнем.

4. Вакцинация

Винокулируйте бактерии в твердую глубокую культурную среду. Этот метод используется для инокуляции анаэробных бактерий или наблюдения за физиологическими показателями при идентификации бактерий. Метод работы такой же, как и выше, но используемая игла для прививки должна быть прямой. Проколите инокуляционную иглу от центра культуральной среды до тех пор, пока она не приблизится к дну трубки, но не проникнет, а затем медленно вытащите исходный маршрут прокола.

、 Метод операции разделения:

1. Метод разделения разбавлением

Разогнать отделенный образец к минимуму непрерывным разбавлением, тогда нарисуйте некоторое количество в плиту и смешайте его с средой агара которая соответствующая для плавить, так, что рассеянные бактерии будут зафиксированы на месте для того чтобы сформировать одиночную колонию. Escherichia coli или дрожжи готовят со стерильной водой в виде бактериальной суспензии. Возьмите несколько стерильных пробирок, каждая из которых содержит 9 мл стерильной воды. Пипеткой 1 мл приготовленной бактериальной суспензии и помещаем ее в первую пробирку, содержащую 9 мл стерильной воды, так, чтобы она была разведена 10 раз, что составляет 10-2. Вытащить 1 мл из первой пробирки (10-2) и ввести во вторую пробирку, содержащую стерильную воду, так, чтобы она была разбавлена 100 раз, что составляет 10-2. Действуйте таким же образом, пока он не разбавится до 10-5-10-6. Аккуратно набрать 0,2 мл бактериального раствора каждого разведения в 10-5-10-6 и добавить его в пронумерованную пустую стерильную посуду. Повторите то же разбавление, чтобы приготовить три блюда. Насыпьте расплавленную и охлажденную до 45 агаровую среду в каждую из вышеупомянутых пластин, осторожно поверните, чтобы тщательно перемешать среду и бактериальную суспензию, после затвердевания поместите ее в инкубатор при температуре 37 или 38 градусов и инкубируйте в течение 24-48 часов, наблюдайте за ростом и распределением колоний на тарелке.

2. Метод разделения писца с плоским слоем.

Метод разделения штрихов пластин-это метод разделения микроорганизмов путем разделения инокуляционного кольца на поверхности пластинчатой среды путем зонирования. Принцип состоит в том, чтобы несколько раз разбавить микробный образец «от точки к линии» на поверхности твердой среды для достижения цели разделения. Залить тарелку Растворите говяжий экстракт пептон-агара средней жесткости, залейте тарелку и дайте ей постоять горизонтально, пока не застает. Сожгите привитое кольцо на пламени спиртовой лампы и дождитесь остывания, возьмите смешанную привитую жидкость золотистого стафилококка и кишечной палочки. Держите пластину агара в левой руке и слегка приподнимите крышку, приближаясь к пламени. Удерживайте привитое кольцо справа и вытяните в блюдо. Сделайте линию писца в области на пластине. Кольцо инокуляции находится на 30-40 ° от поверхности пластины. Осторожно прикоснитесь к углу и приложите силу запястья, чтобы слегка скользить по поверхности. Не царапайте и не встраивайте поверхность планшета в основание. Сожгите прививаемую чашку, чтобы убить оставшуюся бактериальную жидкость на прививаемом кольце. После остывания вставьте привитое кольцо в посуду. Сделав небольшой контакт с линией, пересеченной в первой области, поверните на 90 °. Эти два района по-прежнему пересекаются. После маркировки привейте чашку прививания, после охлаждения используйте тот же метод для рисования линий в других областях. После того, как все линии отмечены, используйте специальный карандаш на дне блюда, чтобы указать штамм, дату, группу и название. Поместите всю чашку Петри вверх дном и поместите ее в инкубатор с постоянной температурой. 37 После 24-48 часов выращивания выньте и наблюдайте. Обратите внимание на характеристики переключателя колоний, размер, цвет, край, структуру поверхности, прозрачность и т. Д.

、 Меры предосторожности:

1. Комната прививки должна быть сдержана чистой, скруб кунтертопс и стены с распыленной жидкостью мыла фенола, и окуривать регулярно с молочной кислотой или формальдегидом. Перед каждым использованием его следует стерилизовать УФ-лампой. Регулярно проверяйте стерильность инокуляционной комнаты. Перед входом в комнату вакцинации сначала следует соблюдать личную гигиену, а в буферной комнате следует заменить рабочую обувь, головные уборы, рабочую одежду и маски. Рабочая одежда, рабочая обувь и маски разрешается использовать только в комнате для вакцинации. Его не разрешается посещать другие места, и его следует регулярно заменять и дезинфицировать. На привитых пробирках, треугольниках и флаконах должны быть промаркированы название и дата питательной среды и штамма. Все предметы, перемещенные в комнату для прививок, должны быть протерты 70% спиртом в буферной комнате. Перед прививкой стерилизуйте обе руки 70% спиртом или Xinjieer, не оставляйте пламя спиртовой лампы во время операции; тампон размещается не случайным образом; инструменты для прививки необходимо стерилизовать пламенем до и после использования.

2. Инкубатор следует часто чистить и дезинфицировать.